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PCR实验时该如何选择合适的耗材呢?本篇教你

发布时间: 2022-08-24  点击次数: 77次
  关于PCR实验有哪些影响因素呢?我们一般想到的可能是获取的DNA/RNA质量、反转录的效率、引物的特异性乃至DNA聚合酶的保真度、扩增长度等问题,但很少有人会想到耗材的选择,可能也会影响您的实验结果。
 
  银杏(学名:Ginkgo biloba L.)为银杏科、银杏属落叶乔木。因其已存在数万年之久,也被称为生物界的“活化石”。
 
  关于其基因组的测序和信息分析,早在两年前就由华大基因、浙江大学和中国科学院的科学家团队共同合作完成。后续功能的验证主要包括PCR检测、ChIP、IP、IHC、IF、FISH等手段。而其中就简单的方式就是PCR验证,那关于PCR实验有哪些影响因素呢?
 
  我们一般想到的可能是获取的DNA/RNA质量、反转录的效率、引物的特异性乃至DNA聚合酶的保真度、扩增长度等问题,但很少有人会想到耗材的选择,可能也会影响您的实验结果。那么关于PCR实验耗材我们改如何选择呢?
 
  首先需要明确的是我们做的是哪种PCR实验。根据检测方法的不同,PCR实验分为普通PCR法和荧光定量PCR法,前者一般是终点PCR跑胶法测定,所以在选择耗材时需要关注的主要是耗材本身的导热性和密封性;而后者是实时检测荧光信号,除了导热性和密封性外,对透光性和避光性也有所要求。换句话而言,可以做荧光定量PCR的耗材一定可以来做普通PCR,反之,效果却会差很多!
 
  确定好了实验类型,我们就可以选择耗材了,如前面所述,我们知道了密封性、导热性、透光性、避光性等因素是我们需要关注的,那为什么要关注这些呢?
 
  一、密封性
 
  密封性越好,产物的挥发越少,得到的产物就越多同时气溶胶的产生也越少,对于下一轮实验的污染也就越少,也就意味着假阳性的产生率越低。
 
  二、导热性
 
  导热性越好越均一,PCR的速度就越快,准确度也越高。
 
  三、透光性
 
  这主要是对于荧光定量而言,我们知道它是一种实时定量的方式,那么耗材本身的透光性就直接关系到我们检测到的荧光信号多少,如果选择耗材透光性不足,本该检测到的信号检测不到,那就会造成我们对结果的误判。
 
  四、避光性
 
  这也是针对荧光定量而言的,同上面的因素,如果我们在整个实验过程中没注意避光,带有荧光的试剂过度被消耗,那最直接就会影响我们实验的扩增效率,导致不准确的结果产生。
 
  基因有限公司提供的GENEPLASTIX系列实验室耗材全线产品均是在十万级净化车间注射成型及装配,除了确保无DNase、无RNase、无热源外,在密封性、导热性、透光性、避光性等方面都在市面上表现比较优异。
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