通常为了完成实验,细胞铺展是很常见的。但很多人都不是很会用,而且分布不均,要么中间密而周围稀疏,要么周围密而中间秃。因此接下来就来为大介绍下96孔板铺展细胞的主要流程,希望能够对大有所帮助。
1、般96孔板每孔加入100微升细胞悬液。从靠近底部的孔的左侧进行添加些细胞悬浮液。加半杯后,搅拌细胞悬液,不要加,继续加剩下的半杯。添加完公司所有设计板子后,盖上板子,左手可以轻轻抓住这个板子的左侧,右手轻轻敲击板子的右边缘。如果太强或次数太多,细胞就会集中和积累。顺时针转动盘子,将剩下的三边需要个接个学生敲击,静置约5分钟,然后可以放入37度的培养箱中。
2、加入细胞悬浮液后,打开细胞培养板,从底部向上观察光线,看看细胞是否聚集。然后按底部进行频。
3、如果实验室有摇板机,建议使用本仪器轻轻摇晃。效果好,就是个幅度小,频率高。
4、细胞要尽量分散,大部分处于单状态。离心后,停止。六孔垫上的些齿轮在晃动。摇动时,不要让细胞液流下来,否则所有细胞都会向中心移动,不均匀。
5、当小瓶细胞装满后,继续进行正常数据处理。将其均匀地吹入培养瓶中,然后以每孔 2 ml 分配到 6 孔板中。涂抹后不需要进行观察,用酒精棉擦拭。 然后放入培养箱进行分别朝着左右后转三圈,般是24小时后,每个孔的细胞都非常均匀。
6、计算所需的所有液体和细胞计数,混合均匀并添加到 6 孔板中。六孔板呈八字形水平摆动。在显微镜下观察。如果出现不均匀,如上所述可以再次进行摇晃。如果未直接计数或接种细胞,请在接种 6 孔板期间随时摇动混合瓶。
7、先对96孔板进行上下移动,然后沿水平板进行左右移动,每个发展方向5-6次,但主要是通过晃动后直接可以放入培养箱,不要做学生太多晃动,否则很容易再次进入中间将其重新组合在起。